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悬浮细胞培养早知道
Q1：在培养悬浮细胞时，细胞碎片和死细胞比较多怎么办？
A1：可以通过不同转速分步离心分离，先用200-300rpm离心3min，去除死细胞团和较大碎片，收集细胞上清；细胞上清600-800rpm再次离心3min，去除较小的细胞碎片，收集细胞沉淀；若细胞悬液中仍然有较多碎片，可以重复上述操作多次离心。
Q2：悬浮细胞培养时会有黑色颗粒物产生
可能的原因：
1. 细胞状态不好产生大量碎片聚集在一起；
2. 细胞聚团生长，内部细胞已死亡；
3. 细胞有污染。
解决方法：
1. 低速离心，去除碎片，提高血清浓度调整细胞状态；
2. 用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻轻吹吸细胞获得单细胞悬液，低密度接种于孔板培养，慢慢清除碎片；
3. 判断是哪种细胞污染，加入对应的抗生素或支原体清除试剂；
Q3：半悬半贴细胞，贴壁不牢，容易脱落怎么办？
A3：在处理细胞时，小心操作，不要剧烈晃动培养板，需要换液时先将培养基37℃预热，枪头对着板壁缓慢打出培养基，尽量减少对细胞的刺激；有少数细胞培养甚至需要包被才能贴壁，常用的包被液有：胶原蛋白、多聚赖氨酸、纤粘连蛋白、明胶等。
Q4：细胞处理时遭遇细胞卷边漂浮的解决办法
A4：贴壁性不好的细胞，在高密度时遭遇外部刺激容易卷边漂浮，处理此类细胞时，应提前回温处理细胞所需的培养液或试剂，避免细胞突然遇冷；应使用移液枪以较轻力道将试剂打向容器内壁，避免细胞直接受到较大的外力冲击；当遭遇细胞卷边漂浮时，可将细胞消化重悬，并重新接种于容器中。
