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细胞状态排查 1 2 3
Q1：细胞周围和细胞上有很多小黑点应该怎么办？
A1：细胞出现黑点一般判定为细胞碎片或血清沉淀杂质。如果是悬浮细胞：低速离心（500-600 rpm，5-6 min）收集细胞上清，并更换的培养皿；如果是贴壁细胞：将细胞用PBS洗2-3遍，洗的时候轻轻拍打培养皿，让贴壁不牢的碎片和颗粒脱落，再弃去PBS，消化时先加低浓度的胰酶如0.05%胰酶消化1 min左右，让细胞间隙中的碎片脱落下来，去掉低浓度胰酶，然后正常消化细胞，将收集的细胞悬液低速离心（500-600 rpm，5-6 min），并更换新的细胞培养皿，并可尝试适当增加血清浓度进行培养；如果怀疑黑点是支原体污染，可进行支原体检测。
Q2：细胞背景较脏？
可能原因：
1、细胞刚复苏，有较多死细胞；
2、细胞状态差，分泌物增多；
3、细胞污染。
解决办法：
1、将旧培养基全部去除，用PBS润洗两遍，加入新鲜培养基；
2、更换新鲜培养基，增加血清含量；
3、建议直接将细胞丢弃重新复苏细胞。
Q3：细胞分化严重？
可能原因：
1、传代次数过多；
2、传代时吹打过于剧烈；
3、细胞本身较敏感。
解决办法：
1、降低传代次数，并在传代次数较少时冻存保种；
2、传代吹打细胞时动作轻柔；
3、对于敏感细胞，试剂和操作需温和，例如，提前预热试剂；用不含EDTA的胰酶消化；改用细胞刮处理细胞。
Q4：细胞生长缓慢？
1、是否更换了新的血清或培养基批次，细胞需要一段时间适应；
2、培养基中缺少某些生长因子，如果实验室没有最适宜的培养基，可以先用原培养条件冻存一些，然后逐渐增加新的培养基比例，25%、50%、75%到100%，传代3-5次后，让细胞慢慢适应；
3、判断是不是培养基发生污染，可以先不加抗生素，观察细胞状态；
4、当传代接种量过少时，细胞增长变慢，影响细胞状态，建议增加细胞的接种密度；
5、发现细胞老化的时候，及时更换新的细胞；
6、如果怀疑是支原体污染，一定要隔离疑似污染的培养皿，及时清洁消毒孵箱；并加支原体清除试剂进行清除或直接丢弃细胞。
Q5：细胞内出现空泡，是否是正常现象？
A5：部分细胞本身存在一定的空泡（如HpeG2、Huh-7及一些耐药株等），这个是正常现象。如果只有少数细胞内出现极少空泡，则可能是细胞状态不佳（胰酶消化过度损伤细胞、培养基环境不佳、细胞自噬等），可以通过以下操作进行调整：调整血清浓度、控制消化时间、控制传代比例。如果大部分细胞出现空泡，且单个细胞内空泡数目偏多，则可能细胞代次较高，细胞老化所致，需更换代次较早的细胞。
