旗赛生物科技（武汉）有限公司
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产品简介
间充质干细胞成软骨诱导分化培养基是一款专用于间充质干细胞（MSCs）体外诱导分化成软骨细胞的培养基。可用于骨髓、脐带、脂肪等组织来源的间充质干细胞的诱导成软骨分化。
详细信息
组分名称 | 组分规格 | 组分货号 | 保存条件 | 有效期 |
间充质干细胞成软骨诱导基础培养基 | 193ml | QS-S502-A | 2~8℃ | 12 months |
间充质干细胞成软骨诱导添加物A | 6.8ml | QS-S502-B | -20℃ | 12 months |
间充质干细胞成软骨诱导添加物B | 0.2ml | QS-S502-C | -20℃ | 12 months |
使用方法
1. 诱导液配制
1.1 将添加物A加入分化基础培养基中，配制成成软骨诱导分化预混液。
1.2 按照比例1ml成软骨诱导分化预混液中加入1μl添加物B，配制成成软骨诱导分化完全培养基。
2. 干细胞的准备
2.1 将对数生长期的细胞消化下来计数，取5×105个细胞转移到15ml离心管中，250g离心4min。
2.2 弃上清，加入0.5ml成软骨诱导分化培养基预混液，重悬细胞，150 g离心5 min。
2.3 小心弃去上清，加入0.5ml成软骨诱导分化培养基诱导液，重悬细胞，150 g离心5min。
2.4 将15ml离心管的管盖稍稍旋开，放置于37℃，5% CO2培养环境下培养。
3. 细胞分化诱导
3.1 当细胞团出现聚团现象时（一般为24h或48h后，视实际情况而定），轻弹离心管底部使软骨球脱离管底悬浮在液体中。
3.2 每隔2~3 d给细胞更换新鲜的成软骨诱导分化完全培养基，每管约 0.5 mL，直至管内形成直径 1.5~2 mm 的软骨球，即可准备染色鉴定。
4. 染色鉴定
4.1 将软骨球从离心管中转移至EP管，并使用1×PBS清洗两次，最后置于适量的4%中性甲醛溶液中。
4.2 软骨球经石蜡包埋后切片。
4.3 将石蜡切片脱蜡和脱水，使用阿利辛蓝染色液染色30 min，用自来水冲洗2 min，蒸馏水冲洗1次。
4.4 显微镜下观察成软骨染色效果，并进行图像采集和诱导评估。诱导成功时，软骨组织中的内酸性粘多糖可被阿利辛蓝染成蓝绿色。
NOTE: 干细胞的成软骨分化水平因细胞类型、细胞供体来源，培养条件、细胞代次、细胞状态和分化时间等因素而异。
注意事项
1. 本产品组分均为无菌分装，可直接配制成完全培养基使用。
2. 务必将添加物B分装保存在-20℃以下，避免反复冻融，可保存12 months；
3. 加入添加物B的成软骨诱导分化完全培养基务必现配现用，4℃保存不可超过 12 h。
4. 完全培养基储存条件：2~8℃，避光；配制后有效期：2 weeks，配制后请在有效期内使用完毕。
5. 本品可分装冻存，避免反复冻融，使用时注意无菌操作。
6. 本产品仅用于科研实验，不可用于临床治疗。
